7500定量PCR儀是特異性靶基因檢測(cè)與定量的一體化平臺(tái)。7500將PCR熱循環(huán),熒光檢測(cè)和各種應(yīng)用分析軟件結(jié)合在一起,可以動(dòng)態(tài)觀察PCR每一循環(huán)各反應(yīng)管中PCR擴(kuò)增產(chǎn)物逐漸增加的情況。PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)束后可以馬上得到定量結(jié)果,無需凝膠電泳分析,無需純化PCR產(chǎn)物,無需進(jìn)行任何實(shí)驗(yàn)操作。7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀采用96孔反應(yīng)板或單個(gè)及8聯(lián)管,反應(yīng)體積25-100微升,實(shí)驗(yàn)可以在不到2小時(shí)內(nèi)結(jié)束。與其他人工基因定量分析方法如Northern blotting or RNase-protection assays相比,7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)具有時(shí)間省,靈敏度高,準(zhǔn)確性好和線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。
是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因,利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在7500定量PCR儀技術(shù)的發(fā)展過程中,兩個(gè)重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用:
在90年代早期,TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn),它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測(cè)PCR產(chǎn)物成為可能。
第二此后熒光雙標(biāo)記探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時(shí)地監(jiān)測(cè)反應(yīng)全過程。這兩個(gè)發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致7500定量PCR儀方法在研究工作中的運(yùn)用。
7500定量PCR儀
7500定量PCR儀系統(tǒng)的特色:
1、擴(kuò)增反應(yīng)曲線的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。
2、采用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行靶基因的定量。
3、光源使用時(shí)間監(jiān)測(cè)及儀器系統(tǒng)自我診斷程序。
4、反應(yīng)板設(shè)置指南,使實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)非常簡(jiǎn)單,即使是復(fù)雜的多重定量實(shí)驗(yàn)也是如此。
5、自動(dòng)設(shè)定熒光基線,自動(dòng)計(jì)算熒光閾值使實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析大大簡(jiǎn)化。
6、自動(dòng)SNP分型軟件以直觀的圖表輸出分型結(jié)果并自動(dòng)進(jìn)行分型質(zhì)量評(píng)分。
7、解離曲線數(shù)據(jù)采集操作簡(jiǎn)單觀察方便,可以在儀器運(yùn)行時(shí)觀察解離曲線數(shù)據(jù)。
8、觀察實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線時(shí)可以非常方便的標(biāo)定所對(duì)應(yīng)的樣品孔位置。
9、基因表達(dá)相對(duì)定量軟件提供強(qiáng)大的結(jié)果分析顯示,可以自動(dòng)將多達(dá)10塊96孔板基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)同時(shí)分析,并自動(dòng)去除無關(guān)項(xiàng)數(shù)據(jù),該軟件為選購件。